El recorrido comienza con un pequeño y rápido paseo urbano por el casco histórico de Peñafiel discurriendo junto a algunos de sus monumentos más conocidos.

Se abandona la Villa a través del pinar San Pablo hasta la Senda del Duero, transcurriendo por el margen izquierda de este sendero, el GR14, donde se atraviesa una de las pasarelas de madera del Duero, para posteriormente llegar hasta la bella San Bernardo, pasando por la puerta del Monasterio de Santa María de Valbuena, una joya del cisterciense y que en la actualidad alberga la sede de Las Edades del Hombre. Desde aquí, la ruta asciende tomando sentido de vuelta, disfrutando de las magníficas vistas de la Ribera que otorgan los característicos oteros castellanos.

En la segunda parte del trazado se vuelve a retomar la senda, remontando el curso del Duero hasta entrar en una de las poblaciones más representativas de la Ribera del Duero: Pesquera. A partir de aquí, comienza la parte más exigente del recorrido, teniendo que volver a coger altura para dirigirse a la localidad de Curiel de Duero, entrando en ese momento en los últimos kilómetros de la prueba.

Se accederá de nuevo al casco urbano de Peñafiel por otro de los corredores fluviales de la comarca, la senda Del Río Duratón, un bello entorno que hará descansar la vista de los participantes y prepárales para el último esfuerzo: la ascensión  al Castillo de Peñafiel, cota por encima de los 900m. de altitud.

Desde ahí, y tras recorrer los muros centenarios de esta fortaleza, sólo resta el paseo final, en raudo descenso hasta la Plaza del Coso donde estará situado la zona de meta. ​ Para aquellos corredores que quieran disfrutar del recorrido a su ritmo, Ribera Run Race ofrece la posibilidad de hacer todo el recorrido en modalidad Senderista. ​